产品货号：
SN0061
中文名称：
第一链cDNA合成试剂盒(用于荧光定量PCR，清除基因组DNA)
英文名称：
TarScript First-strand cDNA Synthesis Kit for qPCR(with dsDNase)
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
适用范围：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
常见问题：
相关搜索：第一链cDNA合成试剂盒(用于荧光定量PCR，清除基因组DNA)
本制品是一款高效、便捷的第一链cDNA合成试剂，TarScript第一链cDNA合成预混液中包含TarScript反转录酶及其反应Buffer、Rnasin、dNTPs、Oligo(dT)20VN和随机引物等第一链cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。
本制品中包含的TarScript反转录酶是新一代逆转录酶，50℃反应，热稳定性强、逆转录效率高。dsDNase可有效去除RNA模板中残留的基因组DNA，保证后续定量结果更加可靠，qPCR引物无需跨内含子设计。使用本制品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。
产品特点：
- 操作简便快捷：基因组去除与逆转录可一步完成。仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。
- 热稳定性强：50℃反应，提高了RNA模板复杂二级结构的逆转录效率。
- 逆转录效率高：与市面上同类产品对比，本制品的逆转录效率更高。
适用范围：
本制品适用于动物、植物及微生物RNA模板的第一链cDNA合成反应，经本制品逆转录得到的产物可兼容下游的染料法qPCR检测。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| TarScript第一链cDNA合成预混液 | 400μL |
| dsDNase | 2×50μL |
| 10×dsDNase Buffer | 200μL |
| 无核酸酶水 | 2×1.0mL |
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
- 预混液中包含有Oligo(dT)20VN和随机引物，不仅适用于含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板的逆转录，但不适用于miRNA等小RNA模板的逆转录。
- 20μL逆转录体系中建议Total RNA的加入量不超过1μg，若加入RNA过量，可能会抑制逆转录反应。
- 建议将逆转录得到的cDNA原液稀释5～10倍后再作为qPCR反应的模板，若直接使用cDNA原液作为模板，建议cDNA原液体积不超过qPCR反应体积的1/10。
- 逆转录产物建议立即用于qPCR反应或保存于-20℃后尽快使用。若需要长期保存，建议于-80℃保存，避免反复冻融。
使用方法：
- 一步法逆转录流程（适用于基因组DNA含量较低的RNA样品）
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
成分 用量 RNA模板 50ng～1μg TarScript第一链cDNA合成预混液 4.0μL dsDNase 1.0μL 无核酸酶水 至20μL 推荐使用试剂盒提取的RNA作为模板。 - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后按下列程序进行反应：
温度 时间 37℃ 2min 55℃ 15min 85℃ 5min
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
- 两步法逆转录流程（适用于基因组DNA含量较高的RNA样品）
- 基因组DNA去除
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液。
成分 用量 RNA模板 50ng～1μg dsDNase 1.0μL 10×dsDNase Buffer 1.0μL 无核酸酶水 至10μL 推荐使用试剂盒提取的RNA作为模板。 - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后按下列程序进行反应（反应结束后立即置于冰上）。
温度 时间 37℃ 2～5min 65℃ 2min 若RNA模板中基因组DNA含量较多，可适当延长37℃孵育时间至5min。
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液。
- 第一链cDNA合成（冰上配制）
- 冰上配制如下反应液
成分 用量 “第1步”的反应产物 10μL TarScript第一链cDNA合成预混液 4.0μL 无核酸酶水 至20μL - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后按下列程序进行反应。
温度 时间 25℃ 10min 50℃ 15min 85℃ 5min 当目标RNA不含有Poly(A)结构时，可进行此步骤。
- 冰上配制如下反应液
- 基因组DNA去除
常见问题：
- 逆转录后的cDNA产物进行qPCR检测，CT值偏高？
- 模板RNA提取失败或存在降解。建议在逆转录反应前一定要电泳验证RNA的完整性，提取RNA后尽快进行逆转录及qPCR操作。
- 基因表达量较低。可适当提高模板RNA用量。
- 逆转录体系、程序或加样等操作不当。建议按照说明书规范操作。
- 模板RNA提取失败或存在降解。建议在逆转录反应前一定要电泳验证RNA的完整性，提取RNA后尽快进行逆转录及qPCR操作。
- 逆转录后进行qPCR，熔解曲线非单一峰？
- RNA模板中含有gDNA。建议逆转录前进行去基因组反应或引物跨内含子设计。
- qPCR引物特异性差。重新设计特异性较好的引物，可通过常规PCR检测引物特异性。
- 引物过量。引物过量可能形成引物二聚体，建议按说明书推荐用量添加。
- 体系可能存在污染。设置无模板阴性对照（NTC）检查体系是否存在污染，若存在污染，建议更换试剂及耗材，使用核酸清洁剂清洁操作台面及实验环境中的气溶胶污染。
- RNA模板中含有gDNA。建议逆转录前进行去基因组反应或引物跨内含子设计。
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